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      乳汁體細胞計數法

      放大字體  縮小字體 發布日期:2010-06-21  瀏覽次數:2152
      核心提示:  推薦使用體細胞計數儀進行乳汁體細胞計數。  體細胞計數法有直接計數法和間接計數法。直接計數法中簡便易行的方法是直接

        食品伙伴網注:本方法源自奶牛乳房炎防治技術指南(試行)(農醫發[20l0]29號)

        推薦使用體細胞計數儀進行乳汁體細胞計數。

        體細胞計數法有直接計數法和間接計數法。直接計數法中簡便易行的方法是直接用顯微鏡進行體細胞計數(SCC),間接計數法就是后面提到的CMT。法。

        l主要試劑和材料

        美藍染色液:美藍乙醇飽和溶液30mL.(美藍2g,95%乙醇100mL),10%氫氧化鈉溶液0.1mL,蒸餾水100mL,將上列溶液混合搖勻,過濾后備用。二甲苯、95%乙醇。生物顯微鏡、載玻片、l0μL。微量加樣器(或移液槍)等。

        2操作方法

        2.1涂片制備

        涂布:充分搖勻新鮮乳樣,用l0μL微量加樣器吸取中部乳汁l0μL,或用接種環蘸取等量的乳汁,將乳樣滴于玻片一端中側,仔細涂布成約lcm2。面積的乳膜(為便于操作,可在玻片下墊襯一張硬紙板,紙板上用毛筆劃數個面積為lcm2的方格透視)。

        干燥、脫脂、固定:涂好乳膜的玻片于37℃溫箱中干燥,然后用二甲苯脫脂5min,再置95%乙醇中固定5~10min。

        染色:玻片干燥后,用美藍染色液染色5min。水洗,再用95%乙醇脫色數分鐘,水洗干燥后鏡檢。

        鏡檢及計數:在生物顯微鏡油鏡下觀察(最好用l0×目鏡,其視野直徑要求為0.016),計數100個視野內的細胞數,然后用下式計算:SCC=100xN/Лr2

        視野面積Лr2=3.1416×(0.016/2)2。=0.0002cm2,

        顯微鏡系數N=I/0.0002×100=500,000

        SCC=系數×每個視野的細胞平均數(即細胞總數÷100):細胞數/mL乳。

        3判定標準

        隨著國際和國內乳品行業的接軌,國內標準也在提高,一般以每毫升牛奶中含20萬個細胞為亞臨床乳房炎的臨界值(+);超過該值為陽性,低于該值則正常。

      編輯:foodyy

       
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      關鍵詞: 乳汁 體細胞
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